一、摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定阿奇霉素的含量。色谱条件：C₁₈色谱柱（4.6×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样量为50μL，检测波长为210nm。实验结果：阿奇霉素峰的理论塔板数为13412，满足《中国药典（2020年版）》中规定的理论塔板数按阿奇霉素峰计算不低于3000的要求；在连续进样7针的重复性测试中，阿奇霉素峰保留时间的RSD为0.148%，峰面积的RSD为0.376%；阿奇霉素的仪器检出限为0.570μg/mL，仪器定量限为1.898μg/mL；阿奇霉素在测定浓度范围内具有良好的线性关系（R²＞0. 9999）。对供试品进行测定，供试品中阿奇霉素的含量为101.2%。因此，Wooking K2025高效液相色谱仪可以满足《中国药典（2020年版）》中阿奇霉素含量测定的需求。

二、背景

本品为白色至类白色结晶性粉末；无臭；微有引湿性；在甲醇、丙酮、无水乙醇或稀盐酸中易溶，在乙腈中溶解，在水中几乎不溶。由《中国药典（2020年版）二部》所收录，为抗菌素药。

三、实验过程

1 范围

适用于阿奇霉素含量的测定。

2原理

阿奇霉素在210nm处有紫外吸收，使用高效液相色谱法测定，外标法定量。

3 试剂与材料

3.1水：符合GB/T6682的一级水；

3.2乙腈：色谱纯；

3.3 磷酸氢二钾：分析纯；

3.4 磷酸：色谱纯；

3.5 20%磷酸溶液：取10mL磷酸（3.4），用水定容至50mL；

3.6 流动相：磷酸氢二钾溶液（称取磷酸氢二钾（3.3）8.7g，加水至1000mL，用20%磷酸溶液（3.5）调节pH值至8.2）-乙腈（3.2）=45:55；

3.7 阿奇霉素对照品。

4 仪器与设备

4.1高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；

4.2分析天平：精确到0.0001g；

4.3pH计：精确到0.01；

4.4真空抽滤装置；

4.5涡旋振荡器；

4.6 50mL容量瓶。

5 测定步骤

5.1 标准溶液的配制

5.1.1 阿奇霉素标准储备液：取阿奇霉素对照品（3.7）适量，加乙腈（3.2）溶解并定量稀释配制成每1mL中含1mg的溶液。

5.1.2 阿奇霉素系列标准工作液：分别取阿奇霉素标准储备液（5.1.1）适量，用乙腈（3.2）配制成阿奇霉素浓度依次为0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.50mg/mL、1.0mg/mL的系列标准工作液。

5.2色谱条件

a）色谱柱： C₁₈，4.6×250mm，5µm；

b）流动相：详见3.6；

c）流速：1.0mL/min；

d）柱温：30℃；

e）检测器及波长：紫外-可见光检测器，检测波长为210nm；

f）进样量：50μL。

6 实验结果

6.1 重复性测试

按照上述色谱条件（5.2）进行采集，阿奇霉素标准溶液（浓度为0.20mg/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

图1 阿奇霉素标准溶液的色谱图

表1 阿奇霉素标准溶液色谱图积分结果

由表1中数据可知，阿奇霉素峰的理论塔板数为13412。

将阿奇霉素标准溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。