一、 摘要

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定市售氯霉素片中氯霉素的含量。色谱条件：C₁₈色谱柱（4.6×250mm，5μm），流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样量为10μL，检测器为紫外-可见光检测器，波长为277nm。实验结果：氯霉素的理论塔板数为9013，拖尾因子为1.24；重复性测试中，氯霉素标准溶液连续进样6针，保留时间的RSD为0.143%，峰面积的RSD为0.749%；灵敏度测试中，氯霉素的仪器检出限为0.014μg/mL，仪器定量限为0.048μg/mL；氯霉素在测定浓度范围内具有良好的线性关系，确定系数R²为0.9998；对样品进行测试，市售氯霉素片中氯霉素含量为79.3%。

二、 背景

氯霉素为白色结晶性粉末，是一种酰胺醇类抗生素；易溶于甲醇、乙醇、丙醇及乙酸乙酯，微溶于乙醚及氯仿，不溶于石油醚及苯。主要用于伤寒、副伤寒和沙门菌属感染。

三、 实验过程

1 范围

适用于氯霉素片中氯霉素含量的测定。

2 原理

氯霉素在277nm处有紫外吸收，使用高效液相色谱法进行测定，外标法定量。

3 试剂与材料

3.1 水：符合GB/T6682的一级水；

3.2 磷酸二氢钾：分析纯；

3.3 庚烷磺酸钠：分析纯；

3.4 三乙胺：分析纯；

3.5 磷酸：色谱纯；

3.6 甲醇：色谱纯；

3.7 0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液：取庚烷磺酸钠（3.3）2.1g，加水溶解并定容至1L，加入磷酸二氢钾（3.2）6.8g，再加三乙胺（3.4）5mL，混匀，用磷酸（3.5）调节pH至2.5；

3.8 流动相：0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液：甲醇=68：32；

3.9 氯霉素对照品：纯度为99.6%；

3.10 氯霉素片样品。

4 仪器与设备

4.1 高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；

4.2 分析天平：精确到0.0001g；

4.3 涡旋振荡器；

4.4 超声波清洗机；

4.5 容量瓶：10mL、100mL，棕色带刻度；

4.6 pH计：精确至0.01。

5 测定步骤

5.1 标准溶液配制

5.1.1 氯霉素标准储备液的配制

精确称取10mg氯霉素标准品（3.9），置于10mL棕色容量瓶中，加1mL甲醇（3.6）使溶解，用流动相（3.8）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1000μg/mL的氯霉素标准储备液。

5.1.2 氯霉素系列标准工作液的配制

将上述标准储备液（5.1.1）用流动相（3.8）稀释，制得氯霉素浓度分别为10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的系列标准工作液。

5.2 样品前处理

精密称定市售氯霉素片10片，精密称定后研细，精密称取适量，加甲醇适量（每10mg氯霉素加甲醇1mL）使氯霉素溶解，再用流动相定量稀释制成每1mL中含氯霉素0.1mg的溶液，滤过，取续滤液。

5.3 色谱条件

a）色谱柱： C₁₈ 4.6×250mm，5μm或者相当的色谱柱；

b）流动相：详见3.8；

c）柱温：30 ℃；

d）进样量：10μL；

e）流速：1.0mL/min；

f）检测器及波长：紫外-可见光检测器，检测波长为277nm。

6 结果

6.1 重复性测试

按照上述色谱条件（5.3）进行采集，氯霉素标准溶液（浓度为100μg/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

图1氯霉素标准溶液（浓度为100μg/mL）的色谱图

表1 氯霉素标准溶液（浓度为100μg/mL）色谱图积分结果

由表1中数据可知，氯霉素的理论塔板数为9013，拖尾因子为1.24，具有良好的峰形。

将氯霉素标准溶液（浓度为100μg/mL）连续进样6针，6针叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。