一、 背景

维生素A、D和E作为饲料的营养添加剂，对动物的健康成长至关重要。维生素A可维持动物上皮组织健康，提升免疫功能，并参与骨骼发育；缺乏维生素A会导致角膜干燥、呼吸道感染及生产性能下降；维生素D可促进钙磷吸收，对骨骼形成至关重要；维生素D不足易引发软骨病、佝偻病等；维生素E作为抗氧化剂，能够保护细胞免受氧化应激损伤；维生素E缺乏会导致肌肉坏死、生殖障碍等问题。

目前饲料中维生素A、D和E的测定方法主要参考国家标准《GB/T 17817-2024 饲料中维生素A的测定 高效液相色谱法》、《GB/T 17818-2025 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法》和《GB/T 17812-2025 饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法》，均使用皂化提取法和直接提取法，其中维生素A和维生素D3的皂化提取法中使用了二维色谱系统，但是维生素A、D和E均是单独测定的，且前处理过程繁琐，试剂消耗量大。本报告采用在线固相萃取方法，使用悟空K2025二维液相色谱系统，同时测定饲料中维生素A、D、E的含量。该方法摒弃了复杂的样品前处理步骤，显著优化了样品分析流程，大幅提升了分析效率。

二 原理

试样经皂化提取后，皂化液经离心、过滤后注入二维液相色谱系统；试样通过在线固相萃取柱浓缩净化后，经一维色谱柱分离维生素A和维生素E（α-生育酚）；再通过中心切割，维生素D经切阀、捕集后经二维色谱柱分离为维生素D2和D3。通过保留时间定性，外标法定量。

三、  结论

本实验使用悟空在线固相萃取-二维液相色谱系统，搭配vADE专用色谱柱，在一维系统中测定VA和α-VE，二维系统中测定VD2和VD3，实验结果表明：VA、VD、VE的理论塔板数范围为8737~38320，拖尾因子范围为1.20~1.64，均具有较好的峰形；VD2和VD3的分离度为1.97，可实现良好分离；混合标准溶液连续进样6针进行重复性测试，VA、VD、VE保留时间的RSD 范围为0.06 %~0.26 %，峰面积的RSD范围为0.23 %~0.47 %，均具有良好的定性定量重复性；灵敏度测试中，VA、VD、VE的方法检出限范围为7.19μg/kg~213.60 μg/kg，方法定量限范围为23.96 μg/kg~711.99 μg/kg；VA、VD、VE在其线性浓度范围内均呈现良好的线性关系，相关系数R均＞0.9999；饲料试样中VA、VD、VE的含量范围为0.0026 mg/kg~216.6 mg/kg；两次独立测定结果的相对偏差范围为-9.13%~4.25 %；加标回收实验中，VA、VD、VE的回收率范围为80.7 %~116.1 %。因此，悟空在线固相萃取-二维液相色谱系统配置vADE专用色谱柱，可同时快速测定饲料中维生素A、D、E的含量。

四、 注意事项

1  整个实验过程需尽量减少光照；

2  VA、VD、VE标准储备液配制后，可置于-20 ℃避光保存1个月；

3  样品前处理过程中，滴加氢氧化钾溶液时需边加边振摇，避免局部过热；整个前处理过程需要尽快完成，避免试样长期暴露在空气中。