大豆异黄酮是存在于大豆及其制品中的一类天然植物雌激素，属于多酚类化合物；因其分子结构与人体内雌激素相似，能够与人体细胞中的雌激素受体结合，进而发挥类似雌激素的生理作用，但活性比人体内雌激素弱。

大豆异黄酮主要来源于黄豆、黑豆等大豆作物，以及由大豆加工而成的各类食品，如豆腐、豆浆、豆皮等。大豆异黄酮具有双向调节激素水平的独特功能；同时具有抗氧化特性，可有效清除体内自由基，有助于预防心血管疾病、癌症等慢性疾病；在维护骨骼健康方面，能减少骨量流失，降低骨质疏松发生风险；对血脂代谢也有一定的调节作用。因此，保健食品中大豆异黄酮的HPLC测定方法，将为精准把控其含量提供有力支撑。

试样经80 %甲醇水溶液提取、过滤后，采用反相色谱法，经烷基键合的反相色谱柱分离，用紫外-可见光检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。

本实验以乙腈和0.01 %磷酸水溶液为流动相，使用梯度洗脱条件，通过对六种大豆异黄酮的理论塔板数、重复性、灵敏度、线性的测定及对大豆异黄酮片试样中六种大豆异黄酮的含量进行测定，实验结果表明：六种大豆异黄酮的理论塔板数范围为43253~147554，对称因子范围为1.19~1.27，均具有良好的峰形；六种大豆异黄酮混合标准溶液连续进样6针重复性测试中，保留时间的RSD范围为0.08 %~0.38 %，峰面积的RSD范围为0.21 %~0.33 %，均具有良好的定性定量重复性；灵敏度测试中，六种大豆异黄酮的方法检出限范围为0.366 mg/100g~0.602 mg/100g，方法定量限范围为1.219 mg/100g~2.006 mg/100g，完全满足《保健食品中大豆异黄酮的测定》征求意见稿中规定的当称样量为0.10g，定容体积为50 mL时，六种大豆异黄酮的检出限为1.0 mg/100g、定量限为3.0 mg/100g的要求；六种大豆异黄酮在8.0 μg/mL~40.0 μg/mL浓度范围内均呈现良好的线性关系，相关系数R均＞0.999；大豆异黄酮片试样中六种大豆异黄酮的含量范围为0.0138 g/100g~1.29 g/100g，大豆异黄酮的总含量为3.13 g/100g；两次独立测定实验中，六种大豆异黄酮的偏差范围为-0.59 %~2.28 %，满足《保健食品中大豆异黄酮的测定》征求意见稿中在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的10 %的要求；加标回收实验中，六种大豆异黄酮的加标回收率范围为99.5 %~113.4 %。因此，悟空 K2025高效液相色谱仪可以满足《保健食品中大豆异黄酮的测定》征求意见稿中对大豆异黄酮片试样中六种大豆异黄酮含量测定的需求。