背景

维生素是维持人体正常生理代谢机能不可或缺的营养素，其含量失衡将直接引发各类健康问题，其中B族维生素作为水溶性维生素，易随代谢排出体外，需持续从外界摄入，因此，建立准确、高效的测定方法对保健食品的质量控制至关重要。

本文建立了一种基于高效液相色谱-双波长紫外检测（HPLC-UVD）的分析方法，旨在同时测定保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺5种B族维生素，并同步检测咖啡因的含量。该方法利用B族维生素与咖啡因在不同波长下的紫外吸收特性，通过双波长切换技术实现了多组分的基线分离与准确定量。

原理

试样经20%甲醇-0.1%磷酸溶液提取和稀释后，经高效液相色谱柱分离、双波长紫外-可见光检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。

结论

悟空K2025HPLC配置双波长UVD检测器，对保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的含量同时进行测定，实验结果表明：

1.5种B族维生素和咖啡因的理论塔板数范围为10294~1371894，拖尾因子范围为0.97~1.14，均具有良好的峰形；

2.混合标准溶液（浓度均为10.0μg/mL）连续进样7针进行重复性测试，5种B族维生素和咖啡因保留时间的RSD在0.04%~0.30%之间，峰面积的RSD在0.14%~0.31%之间，均具有良好的定性定量重复性；

3.5种B族维生素的检出限范围为0.01mg/100g~0.04mg/100g，定量限范围为0.03 mg/100g~0.14mg/100g，咖啡因的检出限为0.01mg/100g，定量限为0.04mg/100g，所有B族维生素和咖啡因的检出限和定量限远低于《GB/T45243-2025保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定》中规定的检出限和定量限；

4.5种B族维生素和咖啡因在1.0μg/mL~20.0μg/mL浓度范围内均呈现良好的线性关系，确定系数R²均在0.999以上；

5.试样中核黄素、烟酰胺、硫胺素和吡哆醇的含量分别为122.367mg/100g、1202.621 mg/100g、53.022mg/100g和149.048mg/100g，烟酸和咖啡因未检出；在重复性条件下获得的2次独立测定试样含量的偏差范围为0.81%~3.52%，满足《GB/T45243-2025保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定》中规定的该值不超过10%的要求；加标回收实验中，5种B族维生素和咖啡因的回收率范围为96.9%~105.6%。

因此，悟空K2025HPLC配置双波长UVD检测器，满足《GB/T45243-2025保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定》中B族维生素和咖啡因同时测定的需求。